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简单高效检测新冠病毒的新方法——sVNT

当前COVID-19大流行持续对世界各地的正常生活运转和经济发展产生不利影响,我们依然需要开发更为简单高效的检测手段来帮助控制疫情。年7月23日,《NatureBiotechnology》上发表了一项研究成果:sVNT——一种替代性病毒中和检测方法能简单高效的检测SARS-CoV-2,在中国、新加坡两个国家入组的患者的检测结果中,该方法特异性为99-%,敏感性为95-%。

虽然qPCR和下一代测序等分子检测技术在病毒遗传变化的急性诊断和监测中发挥了重要作用,但对于追踪接触者,调查无症状感染率,确定准确的病死率,评估康复患者和疫苗接种者的群体免疫和体液保护性免疫,以及寻找天然宿主和中间宿主都需要可靠且通用的血清学或抗体检测。第一类是常规病毒中和测试(cVNT),它可以检测患者血液中的中和抗体,但需要在专门的3级生物安全实验室进行,操作繁琐且需要耗时2-4天。而只需要在2级生物安全实验室进行的pVNT仍需要使用活病毒和细胞。第二种测定类型,例如酶联免疫吸附测定可检测总结合抗体,并且无法区分总结合抗体和中和抗体。这项研究建立了一种基于抗体介导的血管紧张素转化酶2(ACE2)受体蛋白与受体结合域之间相互作用的阻断的替代性病毒中和检测方法——sVNT,不需要任何活病毒或细胞,可以检测到中和抗体,能在2级生物安全实验里1-2小时内完成。

上图表示sVNT检测SARS-CoV-2的机制

与大多数已发表或正在使用的SARS-CoV-2抗体检测方式相比,sVNT的优势之一是它能够检测患者血清中靶向RBD的抗体总量。在高IgM/低IgG,低IgM/低IgG,低IgM/高IgG和高IgM/高IgG四组中均显示出强大的中和活性,证明了该测定的同型独立性。另外对于低IgM/低IgG的检测组,在sVNT中仍可达到70-90%的活性,表明了其优越的敏感性。sVNT还可以以物种无关的方式测量来自不同动物的中和抗体。因此,它可以成为研究COVID-19从天然水库到中间宿主传播中作用的有力工具。为了验证SARS-CoV-2sVNT的性能,研究团队测试了两个不同组的阳性和阴性血清。该测定由两个独立的小组在两个不同的国家进行,以进一步确保可靠性和可重复性。新加坡组在症状发作后第14-33天检测了经PCR确诊的COVID-19患者的份血清和份健康对照血清,测定%的特异性和98.9%的敏感性。中国组在症状发作后的第27-61天采样了50例经PCR确诊的COVID-19患者的血清,并检测了例健康对照血清。测定特异性为%,灵敏度为98%。

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Abstract

ArobustserologicaltesttodetectneutralizingantibodiestoSARS-CoV-2isurgentlyneededtodeterminenotonlytheinfectionrate,herdimmunityandpredictedhumoralprotection,butalsovaccineefficacyduringclinicaltrialsandafterlarge-scalevaccination.Thecurrentgoldstandardistheconventionalvirusneutralizationtestrequiringlivepathogenandabiosafetylevel3laboratory.Here,wereportaSARS-CoV-2surrogatevirusneutralizationtestthatdetectstotalimmunodominantneutralizingantibodiestargetingtheviralspike(S)proteinreceptor-bindingdomaininanisotype-andspecies-independentmanner.Oursimpleandrapidtestisbasedonantibody-mediatedblockageoftheinteractionbetweentheangiotensin-convertingenzyme2(ACE2)receptorproteinandthereceptor-bindingdomain.Thetest,whichhasbeenvalidatedwithtwocohortsofpatientswithCOVID-19intwodifferentcountries,achieves99.93%specificityand95–%sensitivity,anddifferentiatesantibodyresponsestoseveralhumancoronaviruses.Thesurrogatevirusneutralizationtestdoesnotrequirebiosafetylevel3containment,makingitbroadlyaccessibletothewider


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