此文于-7-11首发于本人在科学网的博客，迄今已有次阅读。
武汉生物制品研究所狂犬病检测中心RFFIT技术建立的历程：
年6月，法国巴斯德研究所狂犬病研究室（WHO狂犬病参考与合作中心）前主任蒋安立（HerryTsiang）博士专程访问本所，进行学术交流。
双方达成在狂犬病毒研究方面进行全面合作的意向。
蒋安立博士最早明确提出：在中国要解决狂犬病的防治问题，首先要解决的问题之一就是要建立狂犬病检测中心，而且中国至少要建立4个（分别设在国家CDC、药品检定所、相关产品的生产厂家和兽医部门）。
年2月，受蒋安立博士之邀，我室的严家新研究员去法国巴斯德研究院学习狂犬病毒抗原和抗体的检测技术，带回了蒋安立博士赠予的许多资料和实验材料。
年3月，蒋安立博士再次专程访问我所。
此后十余年里，蒋安立博士每年都要访问中国；其接班人Bourhy博士也多次访问中国，与我所共同开展狂犬病毒的分子流行病学及相关诊断试剂的研究，协助我所建立符合WHO标准的狂犬病检测中心，共同培养博士研究生，共同向欧共体等机构申请科研课题经费等。
年当年，本室就用自行研制的多株抗N单克隆抗体混合制备出了荧光标记抗体，在国内首次建立了RFFIT检测抗体的方法。
相关结果曾在年的全国性学术会议上报告。
年初，在中国生物制品学杂志正式发表了相关论文（见下文，或点击本文末尾的蓝字＂阅读原文＂获取该论文的全文）。
该论文的结果再次证明RFFIT的重复性、特异性和灵敏度都不低于MNT(小鼠中和试验)，同时具有更加快速、价廉、简便等优点，在大多数需要检测RV中和抗体的情况下可取代MNT。
年10月，由PRA（中法先进研究计划）支持、由蒋安立和Bourhy博士发起并组织的中法狂犬病诊断和控制培训班成功地在中国CDC传染病所（北京）举办（唐青主持）。
我所的严家新和徐葛林参加了这次培训班。
我所还将几种狂犬病检测试剂在培训班上进行了试用，与国外产品比较的结果证明效果很好。
本室产品曾四次送到法国巴斯德研究所WHO狂犬病参考与合作中心试用，结果特异性和敏感性都优于国外同类产品。
在国内数次全国性狂犬病研讨会和学习班上，我们建立的方法和制备的试剂都获得了好评，在与国外试剂的大量现场对比试验中都证明效果相同或更好，而成本则大幅度降低。
多年来，法国巴斯德研究所不仅大量购买我们生产的检测试剂盒，还多次购买我们的单抗(原材料)用于相关研究。
我室制备的狂犬病毒检测试剂先后出口到法国、突尼斯、希腊、伊朗等国用于狂犬病实验室诊断，据用户反馈信息，我们的产品检测灵敏度优于国外同类试剂。
关于RFFIT基本原理的主要中文参考文献（原论文发表在中国生物制品杂志，年第11卷第2期93－96页，点击本文末尾的蓝字＂阅读原文＂可获取该论文的全文）：
论文题目：
检测狂犬病毒中和抗体的快速荧光灶抑制试验(RFFIT)方法的建立
作者：
严家新李承平朱家鸿曹瑞瑶薛红钢刘碧芬徐葛林
作者单位：
卫生部武汉生物制品研究所（武汉）
（本工作得到法国巴斯德研究所WHO狂犬病参考与合作中心主任HerryTsiang博士的技术指导和法国巴斯德梅里厄血清疫苗公司(PMSV)的部分资助。）
提要
在国内首先制备出抗狂犬病毒(RV)核蛋白(NP)荧光标记抗体的基础上，建立起检测RV中和抗体的快速荧光灶抑制试验(RFFIT)方法，经与小鼠中和试验(MNT)比较，其重复性、特异性和灵敏度均无显著差异。该方法在大多数需要检测RV中和抗体的情况下可取代MNT。
关键词
狂犬病毒中和抗体细胞培养狂犬病毒的快速滴定快速荧光灶抑制试验(RFFIT)
狂犬病目前在中国和许多发展中国家仍是一个严重问题[1-3]，因而迫切需要建立和推广与狂犬病毒(RV)有关的各种快速、实用的检测方法。
WHO专家委员会肯定并推荐将小鼠中和试验(MNT)和RFFIT作为检测RV中和抗体的两项基本方法[4]，并建议在可能时尽量用RFFIT代替MNT，因前者更快速、价廉，且灵敏度与MNT相同。
进行RFFIT需要有抗RV核蛋白(NP)荧光标记抗体。我们在国内首先试制成功此关键试剂[5]的基础上，建立起微量RFFIT方法，并对该方法的重复性、特异性和灵敏度与MNT进行了比较。
该方法有希望在狂犬病的临床诊断、疫苗质量控制和流行病学调查等项工作中获得广泛应用。
现将有关实验的结果报告如下。
材料和方法（略〉
结果（略）
讨论
本室制备的mNF成本低廉，效果稳定，在上述应用试验中都与法国巴斯德Sanofi诊断用品公司相应产品pNF的特异性和敏感性完全相同，在法国巴斯德研究所WHO狂犬病参考与合作中心对这两种试剂进行的对比试验也得到相同结果(H.Tsiang,个人通讯）。
在应用抗NP荧光标记抗体的基础上建立的RFFIT方法，其原理和所得结果与MNT有高度的一致性(它们所专一检测的都是特异性地针对RV的保护性中和抗体)，而且比MNT更加快速(实验所需时间由14天降至2个工作日)、价廉，重复性更好，因此得到WHO的肯定和推荐[4]，在国际上已成为最广泛接受的对MNT的替代方法。
Fitzgerald等[8]曾进行3个实验室的合作研究以比较MNT和RFFIT的重复性。在同一实验室对同一样品进行检测，采用MNT所得结果的变异范围为67%-%，采用RFFIT的变异范围为68%-%。
本文中分别用RFFIT和MNT各4次重复测定参考血清A和B的中和滴度，采用MNT所得结果的变异范围对样品A和B分别为81%-%和78%-%，采用RFFIT所得结果对样品A和B的变异范围分别为83%-%和86%-%。
结果都证明RFFIT的重复性不低于MNT，而且这两种方法检测的结果间的差别均无显著意义。
Zalan等[9]将RFFIT方法微量化，即用96孔细胞培养板代替价格昂贵的Lab-Tak细胞培养载玻片。其优点是可同时处理大量样品，大大减少了试剂用量，而且观察结果容易并能减少判定上的误差。
本文的结果也证明这种微量化方法优点更多，值得推广。
综上所述，本文的结果再次证明RFFIT的重复性、特异性和灵敏度都不低于MNT，同时具有更加快速、价廉、简便等优点，在大多数需要检测RV中和抗体的情况下RFFIT可代替MNT，有希望在我国狂犬病的防治和研究中获得广泛应用。
参考文献
1.林放涛，于恩庶，朱家鸿，等.《狂犬病学》，福州：福建科学技术出版社，，P1.
2.严家新.狂犬病流行简史，中华医史杂志，（4）：-
3.严家新，朱家鸿.狂犬病毒分子流行病学研究进展,国外医学(病毒学分册),,2(2):34-37.
4.WHO.WHOExpertCommitteeonRabies,EightReport,Geneva,WHO,,1.
5.严家新,李承平,徐葛林,等.抗狂犬病毒核蛋白荧光标记抗体的制备和初步应用,《第四次全国生物制品学术会议论文汇编》，武汉，，P。
6.BourhyH,SureauP.LaboratoryMethodsforRabiesDiagnosis,Paris,PasteurInstitute,0,P.
7.中华人民共和国卫生部.《中国生物制品规程(一部，一九九五年版)》，北京：中国人口出版社，，P.
8.FitzgeraldEA,CabassoVJ,SmithJS,etal.Acollaborativestudyonthetestingofrabiesimmuneglobulin(human)bythemouseneutralizationtest(MNT)andtherapidfluorescentfocusinhibitiontest(RFFIT).JBiolStand,,7(1):67.
9.ZalanE,WilsonC,PukitisD.Amicrotestforthequantitationofrabiesvirusneutralizingantibodies.JBiolStand,,7(3):.
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