人类乳头瘤病毒(HumanPapillomavirus,HPV)是一种环状双链DNA病毒。按照HPV所引起皮损的良、恶性质,感染肛门生殖器的HPV亚型可分为高危型和低危型。目前公认,宫颈高危型HPV(HighRiskHPV,HR-HPV)感染是宫颈癌发生的必要条件[1-3]。对于性病门诊女性尖锐湿疣患者这一特殊人群,至今尚无数据说明其宫颈HR-HPV感染与普通女性相比较情况如何。因此,是否应该对这部分女性进行宫颈高危型HPV检查,目前并没有统一的认识。
本研究比较了尖锐湿疣(CondylomataAcuminate,CA)患者与普通女性宫颈感染HR-HPV的情况,探讨对CA患者进行宫颈HR-HPV检测的必要性和意义。
1对象与方法
1.1研究对象
选择年2月—年2医院皮肤科性病中心就诊的例女性外阴尖锐湿疣患者为病例组。选医院体检中心参加健康体检的例女性为对照组。二组患者的平均年龄、户籍、文化程度、家庭人均月收入等参数比较差异无统计学意义。见表1。
表1二组一般情况(例,%)
1.1.1病例组纳入标准与排除标准.纳入标准:①外阴有肉眼可见的疣体;②醋酸白试验阳性;③经过治疗后外阴疣体消退3个月以上没有复发;④阴道和宫颈没有肉眼可见的疣体或糜烂。排除标准:①外阴疣体反复出现者;②妊娠期或哺乳期妇女;③合并其他性传播疾病;④有严重的免疫功能低下,或需长期使用免疫抑制剂或糖皮质激素者;⑤肝肾功能异常或有严重的心脏、造血功能系统功能异常者;⑥有脏器功能衰竭或恶性肿瘤等危重原发疾病者。
1.1.2对照组纳入标准①外阴阴道无明显病变;②既往没有尖锐湿疣、梅毒等性传播疾病史;③无重要脏器或免疫系统疾病。
1.2研究方法
1.2.1标本采集和保存用Digene公司的二代基因杂交捕获(HybridCapture,HCⅡ)专用取样刷,在宫颈口逆时针转3圈,停留10s后取样完成。将带有宫颈脱落细胞的取样刷置于Digene公司的STM转运保存液中,编号,4℃保存。
1.2.2裂解用漩涡混合器混匀各管标本。加5滴蓝色指示剂于DenaturationTegeant中混匀配成裂解液。移液器吸取裂解液μl,加入各标本管及阳性对照管,混匀。阴性对照加裂解液1ml。将各管置于65℃水浴45min,待各管均呈紫色,样本DNA双链分解为单链。
1.2.3杂交在96孔酶标板的每个孔加入25μl配备好的HPV探针溶液,移液器吸取75μl已经混匀及裂解的标本和阳性、阴性对照至各孔。酶标板贴上胶纸并放于振荡器(±)rpm振荡,3min,所有孔变成黄色。酶标板置于加热器65℃孵化60min,RNA探针与DNA单链结合为RNA-DNA杂交体。
1.2.4捕获将酶标板各孔液体μl移至捕获孔,贴上胶纸,振荡(±)rpm,60min。将板用力拍打于吸水纸上至干,特异性抗体将RNA-DNA杂交体固定在微孔壁上。将75μlDetectionReagent1移到各孔,盖上胶纸,在20~25℃放置30min。将板用力拍打于吸水纸上至干,结合有碱性磷酸酶的多个第二抗体与RNA-DNA杂交体结合,使信号放大。
1.2.5冲洗用冲洗液冲洗6次,于吸水纸上用力拍打并置于纸上5min至干。
1.2.6收集信号将75μlDetectionReagent2移到各孔,盖上胶纸,置于黑暗处,20~25℃,15min,碱性磷酸酶使酶底物发光。
1.2.7判读在Digene公司的DML系统上判读。用含1pg/mlHPVDNA样本形成的RNA-DNA-抗体的光强度作为阳性对照(positivecontrol,PC),分析待测样本的光强度(relativelightunit,RLU),得到RLU/PC值。RLU/PC≥1即为阳性。
1.3统计学方法
所有数据应用SPSS17.0软件进行统计学分析,计量资料以±s表示,二组比较采用两独立样本的t检验,计数资料以率表示,采用χ2检验,检验水准α=0.05。
2结果
例尖锐湿疣患者中77例宫颈HR-HPV阳性(77/,54.2%),其中病毒载量(RLU/PC)1~24例(24/77,31.2%),10~16例(16/77,20.8%),~22例(22/77,28.6%),≥015例(15/77,19.5%)。例健康组中28例宫颈HR-HPV阳性(28/,13.2%)。其中病毒载量(RLU/PC)1~10例(10/28,35.7%),10~10例(10/28,35.7%),~7例(7/28,25.0%),≥01例(1/28,3.6%)。二组间HR-HPV阳性率有显著差异(P0.05)(见表2)。二组病毒载量≥0者差异具有统计学意义(P0.05)(见表3)。
表2二组宫颈HR-HPV感染情况(例,%)
表3二组宫颈HR-HPV病毒载量(例,%)下载原表
3讨论
在全世界范围内,宫颈癌是第三位导致女性死亡的恶性肿瘤[4]。持续的宫颈HR-HPV感染是宫颈癌发生的必要条件。宫颈HR-HPV检测可及早发现宫颈HR-HPV感染,显著降低宫颈鳞状细胞癌的发生率和死亡率[6-8]。中国各地的大型流行病学调查发现,普通女性宫颈HR-HPV的感染率是9.7%~13.5%[9-11],本研究发现尖锐湿疣女性患者宫颈HR-HPV感染率为54.2%,显著高于普通女性。因此,在治疗尖锐湿疣的同时,假如忽视了女性患者宫颈HR-HPV的检查,患者将会比普通女性更容易受到宫颈癌的潜在威胁。
本研究使用的HC-Ⅱ可检测13种病毒亚型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68),其准确性及敏感性均已得到证实[12-14]。JeanLuc等[15]用HC-Ⅱ和real-timePCR二种方法测量同一批样本,发现二种方法的测量结果有很好的相关性,证明HC-Ⅱ可以用作HPV定量检测。研究发现,高病毒载量增加了宫颈癌前病变及宫颈癌发生的可能性[16]。因宫颈上皮内瘤变(CervicalIntraepithelialNeoplasia,CIN)而进行宫颈锥切的患者中,术前宫颈HR-HPV病毒载量高的患者术后病毒清除率显著降低,CIN复发的可能性增高[17]。本研究发现尖锐湿疣组宫颈HR-HPV高病毒载量(RLU/PC≥0)患者数量明显高于普通人群。说明这部分人群发生宫颈癌及癌前病变的危险性高于普通人群,并且治疗后CIN复发可能性较高。
本研究通过将尖锐湿疣患者与健康人群宫颈HR-HPV阳性率及病毒载量相比较,发现外阴尖锐湿疣患者宫颈HR-HPV阳性率和高病毒载量者较普通人群显著增高。说明在治疗女性患者尖锐湿疣的同时,应该重视其宫颈HR-HPV的检查。在目前我国尚未普及女性宫颈HR-HPV筛查的情况下,在重点人群中及时发现和治疗早期病变对于降低宫颈癌的发生率尤为重要。当然现在已经可以足不出户的进行筛查了，之前的文章也介绍过，足不出户！教你如何筛查尖锐湿疣及宫颈癌
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